尿素氮（BUN）試劑盒說明書
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理
在堿性條件下，尿酶水解尿素產(chǎn)生氨，氨與次氯酸反應(yīng)生成氯胺，再與酚衍生物作用生成綠色吲哚酚，在 630nm 處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 4mL 蒸餾水充分溶解。
試劑二：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿后于25℃，10000g 離心10min，取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）； 然后 4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清或其它液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
樣品（μL） |
|
| 20 |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） |
| 20 |
|
H 2 O（μL） | 20 |
|
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試劑一（μL） | 40 | 40 | 40 |
充分混勻，于 37℃反應(yīng) 10min | |||
試劑二（mL） | 70 | 70 | 70 |
試劑三（mL） | 70 | 70 | 70 |
充分混勻，于37℃顯色10min，于微量石英比色皿/96孔板，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定630nm處吸光值， 記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管 | |||
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次
計(jì)算公式
1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算
尿素氮含量（mg/g）=(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C 標(biāo)準(zhǔn)品÷W= 0.005×(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)÷W
2. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
尿素氮含量（mg/104cell）=(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C標(biāo)準(zhǔn)品÷細(xì)胞數(shù)量= 0.005×(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量
3. 按液體體積計(jì)算
尿素氮含量（mg/L）=(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C 標(biāo)準(zhǔn)品=5×(A測(cè)定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，5mg/L；W：樣品質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)
1. 配制好的試劑一在2-8℃條件下可保存一周。
2. 最di檢出限為80μg/L。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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